EBM-2培養(yǎng)基國內(nèi)家代理公司---始于2001年畢特博生物
以下是網(wǎng)頁的對話內(nèi)容摘要
請教：
國內(nèi)哪家公司代理有VEGF的EBM-2培養(yǎng)基。
是畢特博嗎。
寒冰 wrote:
請教：
國內(nèi)哪家公司代理有VEGF的EBM-2培養(yǎng)基。
是畢特博嗎。
我查到的也就只有這家
以下是來源網(wǎng)址的具體內(nèi)容：
http://www.med66.com/html/ziliao/yixue/19/23da6eee3d452c3c3ea8e61068369229.htm
請問用什么培養(yǎng)液好啊
tonywujun wrote:
同志們，這段時間養(yǎng)小鼠骨髓來源的EPC出現(xiàn)奇怪現(xiàn)象，其中一些細(xì)胞4天后快速增殖，迅速形成片狀集落，細(xì)胞可以排列形成線樣結(jié)構(gòu)，且可以融合，有些還有分支，形成的結(jié)構(gòu)很像帶有分支的血管，奇怪了，我從來沒有見過這種細(xì)胞，請各位戰(zhàn)友幫忙看看這可能是什么細(xì)胞。
一張100倍的圖
應(yīng)該是瓶子上的劃痕留下的。細(xì)胞沿著劃痕生長，看看我養(yǎng)的細(xì)胞，更漂亮。呵呵，當(dāng)時覺得不可思議。其實，是個肝癌細(xì)胞而已。
（縮略圖，點擊圖片鏈接看原圖）
不過，我做實驗，發(fā)現(xiàn)好多次，原代EPC培養(yǎng)的時候，確實會出現(xiàn)部分細(xì)胞連接成環(huán)狀，幾乎每次原代都可以發(fā)現(xiàn)。可以肯定，不是劃痕所造成的，下圖是比較典型的一張，偷懶，沒有用攝像頭拍，用數(shù)碼相機拍的，所以拍攝效果不太好。‘
（縮略圖，點擊圖片鏈接看原圖）
個人同意yulinlong戰(zhàn)友的觀點。
yulinlong戰(zhàn)友的圖片又多又漂亮，與他相比真是遜色多了，
匿了。
首先我肯定的是這不是fibronectin劃痕造成的結(jié)果，培養(yǎng)皿內(nèi)形成的片狀細(xì)胞團塊很大，目前已經(jīng)對此細(xì)胞進行了lectin和CD31的免疫熒光鑒定，不表達，基本上表明其不是內(nèi)皮及其前體細(xì)胞，具體是什么細(xì)胞還不清楚，但從形態(tài)上講，不像成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞，不管怎樣，以前從來沒有見過，且比較了所有相關(guān)帖子上的細(xì)胞，沒有見到相類似的細(xì)胞，真是郁悶呀，哪位高人提供一下線索呀。
用國產(chǎn)淋巴細(xì)胞分離液分離、提取白膜層后老是混有較多的紅細(xì)胞，其影響單個核細(xì)胞的貼壁。本人所在實驗室建議使用蒸餾水破除。
請問各位高手，你們是怎么處理這些紅細(xì)胞的？
另外使用羥乙基淀粉法效果好嗎？
小小鳥 wrote:
八戒兄：
你在實驗中也能將外周血單核細(xì)胞濃度調(diào)整到1*10的9次方/L？真是羨慕啊。不過聽我?guī)熃阏f外周血單核細(xì)胞不多，要將10 ml的血分離出這么多單核細(xì)胞我還是有點詫異。請問八戒兄也是用10ml血分離的嗎？
1*10的9次方/L只是個濃度問題，并不是個數(shù)量，10ml血分離1*10的9次方/L×
10ml,是不是？
1*10的9次方/L只是個濃度問題，并不是個數(shù)量，10ml血分離1*10的9次方/L×
10ml,是不是？
這個我明白，但我從文獻上看到：成年循環(huán)EPCs數(shù)量非常有限（100～500個/ml），照1*10的9次方/L×10ml這樣算，10ml外周血有10的7次方EPCs，還是跟文獻不符啊
請教：
國內(nèi)哪家公司代理有VEGF的EBM-2培養(yǎng)基。
是畢特博嗎。
寒冰 wrote:
請教：
國內(nèi)哪家公司代理有VEGF的EBM-2培養(yǎng)基。
是畢特博嗎。
我查到的也就只有這家
在學(xué)習(xí)了playingstone 戰(zhàn)友的2篇大作（一篇已經(jīng)發(fā)表：生物醫(yī)學(xué)工程與臨床，2005，7，9（4）243～246.恭喜恭喜）之后，受益頗豐：
1.playingstone 戰(zhàn)友培養(yǎng)方法比較有新意，綜合了目前2種有爭論的培養(yǎng)方法。我想問下48h內(nèi)貼壁細(xì)胞和48h后貼壁細(xì)胞中內(nèi)皮祖細(xì)胞的純度比較問題，哪個更純一些？也就是說哪個內(nèi)皮祖細(xì)胞含量更多些？
2.playingstone 戰(zhàn)友采用骨髓來源的培養(yǎng)方法，在用密度為1.071的淋巴細(xì)胞分離液（上海華精生物制品廠）進行梯度密度離心分離單核細(xì)胞，18℃,1500r/min離心23min后。想問下，實驗室采用的是什么離心機，哪個廠家的。因為我們自己也在用這種淋巴細(xì)胞分離液，效果很不好，用的是Beck man高效離心機，400g，30min，效果很差，幾乎看不到白膜層，連紅細(xì)胞都沒離心下來，試劑是剛買的，未過期。很是郁悶。
3.playingstone 戰(zhàn)友在離心后，似乎未經(jīng)過洗這一步，就直接制成細(xì)胞懸液，是不是在骨髓來源的培養(yǎng)方法中是這樣的呢，有點疑問？呵呵
謝謝，歡迎討論！
一般是800G的離心力，既然你的機子是400G 那就把轉(zhuǎn)速適當(dāng)調(diào)高就是，比方現(xiàn)在是1500R/M,先調(diào)到2500R/M左右試試。,
小小鳥 wrote:
八戒兄：
你在實驗中也能將外周血單核細(xì)胞濃度調(diào)整到1*10的9次方/L？真是羨慕啊。不過聽我?guī)熃阏f外周血單核細(xì)胞不多，要將10 ml的血分離出這么多單核細(xì)胞我還是有點詫異。請問八戒兄也是用10ml血分離的嗎？
我是10毫升分大約10的7 單個核細(xì)胞的
兩個問題：
1.UEA-I和DiLDL雙染色陽性細(xì)胞為正在分化的EPCs的原理是什么？而且我見一篇文獻竟然用是否DiLDL染色陽性區(qū)別EPC和EC，不解
2.有用多聚賴氨酸代替Fn包板的嗎？
請都各位，我準(zhǔn)備培養(yǎng)大鼠的EPC，不知大家所用的VEGF和b-FGF是哪家公司的，有小包裝嗎？
下面是一篇blood上的如何培養(yǎng)EPC的文獻，希望對大家有用。文件太大（475kb)，不能上傳，所以給出全文摘要。
EPC生長特征.doc (35.0k)
我們買的VEGF是 sigma公司的，2微克包裝的，500塊錢，bFGF沒買，我們用的是M199培養(yǎng)基＋VEGF＋PEX＋20％FBS養(yǎng)的兔的EPC，效果還行。
以前用的是EGM培養(yǎng)基，后來有一陣子EGM國內(nèi)缺貨，就改用了上述配方。
兩種相比較，EGM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)穩(wěn)定一些，而且細(xì)胞生長較均勻，現(xiàn)在用的這這種培養(yǎng)基養(yǎng)的EPC原代的時候全部成簇狀生長，也就是說一個培養(yǎng)瓶里長幾大團細(xì)胞，沒有細(xì)胞簇的地方幾乎都是空的。長了6天以后有細(xì)胞的地方非常密，我們就消化，把細(xì)胞吹下來后還是放在原瓶里長，細(xì)胞就長得比較均勻了，生長速度也還可以。
以前用EGM時我們用的是5％血清濃度，現(xiàn)在用M199是20％血清濃度，但是感覺還是沒有EGM時長得快。
請教大家：
加VEGF誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞應(yīng)在什么時候加？大概傳幾代啊？
寒冰 wrote:
請都各位，我準(zhǔn)備培養(yǎng)大鼠的EPC，不知大家所用的VEGF和b-FGF是哪家公司的，有小包裝嗎？
下面是一篇blood上的如何培養(yǎng)EPC的文獻，希望對大家有用。文件太大（475kb)，不能上傳，所以給出全文摘要。
幫你把全文上傳下
分成2部分，都下載后，放在同一個文件下，然后解壓part1就可以了。
2577.part1.rar (244.14k)
22222222222222222222222222222
2577.part2.rar (211.6k)
請問cici_wl 師兄：
你是培養(yǎng)大鼠EPC嗎，EGM是哪家公司的，培養(yǎng)板包被了嗎，是自己包的嗎？
謝謝。
playingstone前輩，請教您一下：
骨髓源的內(nèi)皮祖細(xì)胞是本身就存在于骨髓的，而不是由MSCs分化而來的嗎？如果是，它的前身是什么？
MSCs能不能分化為內(nèi)皮祖細(xì)胞，還是只能分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞？
我見到的文獻好像不管是骨髓、外周血、臍血的內(nèi)皮祖細(xì)胞，都是直接就用內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)。就您所知，有沒有先擴增MSCs，再將其誘導(dǎo)為EPCs的？
請問各位:你們消化EPC時候,覺得好消化嗎?含EDTA的胰酶大概要作用多久啊?
我消化了15分鐘(37度),吹打了幾次才勉強下來!!
請問：
用DMEM低糖 和 高糖 的培養(yǎng)基對細(xì)胞的影響是什么呢？為什么MSC要用低糖的呢？
懇請指教。謝謝！
harry158:
你好，我也打不開下面這篇綜述，能否發(fā)一份到郵箱(newbyte163@163.com)
綜述 <Unresolved questions, changing definitions, and novel paradigms for defining endothelial progenitor cells >
(blood ,106,1525-1531).
我已經(jīng)分離了數(shù)次臍血里的EPC,大家說的這些我好象似曾見過,可鑒定時總是CD133(-)和CD34(-),但每次貼負(fù)在FIBRONECTIN上細(xì)胞也不少,我真不知道如果不是EPC會是什么,作了快3個月了,一直這樣,都快崩潰了,大家?guī)臀页龀鲋饕獍?多謝.
meini:
這片文獻上有很漂亮的EPC集落 "Granulocyte Colony-Stimulating Factor Mobilizes Functional Endothelial Progenitor Cells in Patients With Coronary Artery Disease"(Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2005;25:296-301.)
是pdf 文件,不知道怎么上傳,如果有需要請告訴我郵箱.
我的郵箱是newbyte163@163.com,非常感謝.
求合購：
我現(xiàn)已問好小鼠CD 133 和FLK－1 上流式檢測抗體，最小包裝分別為25微克和50微克。（為Biosource公司產(chǎn)品）（都可以上100管以上）
由于本人只能用一半的量。價錢比較昂貴。想找位戰(zhàn)友一起分享。我在武漢。有意者請與我聯(lián)系。qq 358228927。 手機：13476210795
急！！急！！急！！
不好意思，才回貼。前一段時間出去開會。
現(xiàn)在EPC培養(yǎng)有些進展，也拍了圖片，但我的圖片都比較大，不能上傳，如你感興趣我可以發(fā)給你。從形態(tài)、FCM還是IHC均是EPC。
請問羥乙基淀粉沉淀紅細(xì)胞怎么做？
不好意思，才回貼。前一段時間出去開會。
現(xiàn)在EPC培養(yǎng)有些進展，也拍了圖片，但我的圖片都比較大，不能上傳，如你感興趣我可以發(fā)給你。從形態(tài)、FCM還是IHC均是EPC。
請問羥乙基淀粉沉淀紅細(xì)胞怎么做？
樓上的PDF文件均打不開，各位都能否MAIL給我。再次感激不禁。我有的東西，不會讓各位失望的。多多交流。xiexie
my mail： dryudecai@hotmail.com
強烈建議我們開個網(wǎng)絡(luò)會議！
方式： Hotmail MSN
時間待定：大家商量
我想一起聊天，可能效果更好
為表誠意，我先貼有關(guān)EPC的reriew。
多指教
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