作者：周曄,張莉 作者單位：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院崇明分院,上海 崇明 202150)
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【摘要】 目的：對(duì)用ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原產(chǎn)生“假陽性”進(jìn)行分析及找出解決的方法。方法：用不同的轉(zhuǎn)速和時(shí)間對(duì)同一批標(biāo)本進(jìn)行離心，再用ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原。結(jié)果：同一批標(biāo)本通過增加標(biāo)本的離心時(shí)間和提高離心速度使假陽性結(jié)果減少。結(jié)論：離心是乙肝表面抗原產(chǎn)生“假陽性”主要影響因素。
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【關(guān)鍵詞】 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)夾心法 乙肝表面抗原 假陽性 離心 clin-lab.com
Purpose to the Method that Carries on Analysis and Finds Out to Solve withthe ELISA Examination HBsAg Creation “False Positive” clin-lab.com
ZHOU Ye,ZHANG Li
(Chongming Branch of Renji Hospital,Shanghai Traffic University,Chongming,Shanghai 202150,China)
Abstract: Objective Purpose to the method that carries on analysis and finds out to solve with the ELISA method examination HBsAg creation“false positive”.Methods By using to turn differently to carry on centrifugence to the same batch of specimen with time soon,and then sing ELISA examination HBsAg. Results By increasing time and rotate speed can make the false male result reduced. Conclusion Centrifugence is the main influence factor which creates “false positive”.
Key words: ELISA;HBsAg;False positive;Centrifugence
乙型肝炎在我國(guó)的發(fā)病率很高，是當(dāng)前嚴(yán)重危害人們身體健康的傳染病之一。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝的感染指標(biāo)之一，因此，HBsAg的檢查往往是體檢的項(xiàng)目之一，對(duì)乙肝的預(yù)防和治療具有重要的意義。檢測(cè)乙肝表面抗原，常采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)夾心法以及膠體金免疫層析法(GICA)。ELISA具有操作簡(jiǎn)單、技術(shù)可靠、試劑方便易得等優(yōu)點(diǎn)，特別是20世紀(jì)90年代以來ELISA的靈敏度和特異性都得到了顯著的提高，所以盡管檢測(cè)HBsAg的新技術(shù)如PCR、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)發(fā)光法及時(shí)間分辨免疫熒光法等不斷地被建立和應(yīng)用，ELISA作為一項(xiàng)成熟的檢測(cè)技術(shù)仍有較大的應(yīng)用價(jià)值。故本科室以ELISA為主檢測(cè)HBsAg，GICA則作為體檢篩選檢測(cè)。在使用ELISA HBsAg試劑進(jìn)行血標(biāo)本檢測(cè)時(shí)經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有數(shù)孔出現(xiàn)弱陽性的情況，上海市臨床檢驗(yàn)質(zhì)控中心規(guī)定0.073 5≤OD值≤0.210都要重新檢測(cè)，第2天重新檢測(cè)后陽性率降低。經(jīng)過仔細(xì)的分析、研究和多次的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生假陽性的原因，并找到了解決的方法。
1 材料與方法
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1.1 材料 臨床實(shí)驗(yàn)室
體檢人員的標(biāo)本共180份。
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1.2 試劑與儀器 clin-lab.com
HBsAgELISA試劑盒(上海實(shí)業(yè)科華公司)；全自動(dòng)洗板機(jī)(美國(guó)寶特ELX-50型);全自動(dòng)酶標(biāo)測(cè)定儀(美國(guó)寶特ELX-800型)。
1.3 方法 臨床實(shí)驗(yàn)室
抽取靜脈血，用北京產(chǎn)LDZ5-2離心機(jī)離心取血清標(biāo)本。離心結(jié)束后，試驗(yàn)嚴(yán)格按照HBsAg檢測(cè)的 SOP要求進(jìn)行檢測(cè)。離心程序有4個(gè)：(1)轉(zhuǎn)速1 000 rpm，時(shí)間5 min；(2)轉(zhuǎn)速2 000 rpm，時(shí)間5 min；(3)轉(zhuǎn)速3 000 rpm，時(shí)間15 min；(4)轉(zhuǎn)速3 000 rpm，時(shí)間30 min。
2 結(jié)果
180份標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果(見表1)。表1 180份血標(biāo)本HBsAg檢測(cè)結(jié)果[份(略)]注：與程序#比較，*P<0.05，**P<0.01，#P>0.05。
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3 討論
ELISA檢測(cè)中受到許多因素的影響, 如檢測(cè)時(shí)間、血細(xì)胞[3]、加樣量、洗板方式[4]、血清分離等。通過對(duì)180份標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果的分析比較，發(fā)現(xiàn)試劑的空白和陰、陽性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔OD值都很正常，只有血液標(biāo)本孔OD值的情況異常，原因在于標(biāo)本的離心和血液的放置時(shí)間上。留取檢驗(yàn)標(biāo)本之前，先用金標(biāo)試劑的檢測(cè)，檢測(cè)的結(jié)果全為陰性，在HBsAg的ELISA檢測(cè)中，標(biāo)本的陽性率不應(yīng)該很高[3]。筆者通過增加標(biāo)本的離心時(shí)間和提高離心速度解決了影響試驗(yàn)的關(guān)鍵問題。試驗(yàn)結(jié)論，把標(biāo)本徹底離心分離不溶血，就可得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這說明，標(biāo)本的離心處理好壞直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。血標(biāo)本影響ELISA法HBsAg檢測(cè)結(jié)果的主要原因有[4]：(1)血清中的補(bǔ)體可與IgG的Fc段結(jié)合，可造成假陽性。(2)血漿中纖維蛋白原和酶結(jié)合物一起易粘附到ELISA檢測(cè)板上不易洗掉，可造成假陽性。(3)血清中若有類風(fēng)濕因子(RF)，RF可與抗體結(jié)合，造成假陽性。(4)免疫球蛋白聚合物、免疫復(fù)合物易吸附于塑料表面，可造成非特異性吸附，導(dǎo)致假陽性。為了避免ELISA試劑“檢測(cè)時(shí)假陽性的出現(xiàn)”，為了降低檢測(cè)的假陽性率，取得準(zhǔn)確的結(jié)果，筆者認(rèn)為可采取下列措施：(1)試劑盒在使用前平衡至室溫。(2)使用抗凝血標(biāo)本。(3)溶血標(biāo)本不能檢驗(yàn)，應(yīng)重新抽血[1,2]。(4)冬天抽血后最好放置溫水浴中2小時(shí)凝塊收縮后再行離心檢測(cè)。(5)離心標(biāo)本檢測(cè)之前，要加大離心速度(3 000 rpm)，增加離心時(shí)間，增加離心時(shí)間15 min使紅細(xì)胞和纖維蛋白完全沉淀、離心完全。(6)標(biāo)本放置10 h后再檢測(cè)較好，讓血凝塊更好地收縮，讓標(biāo)本中的非特異性活性物質(zhì)部分或全部失活，降低非特異性反應(yīng)所致的假陽性率但需要時(shí)間較長(zhǎng)。通過以上措施，可降低ELISA法HBsAg檢測(cè)的假陽性率,獲取理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 臨床實(shí)驗(yàn)室
【參考文獻(xiàn)】
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（收稿日期：2008-06-27）
作者簡(jiǎn)介：周 曄(1973-)，女，上海人，主管技師。 clin-lab.com