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【關鍵詞】 干擾試驗 【摘要】 目的 考察生附注射液細菌內毒素檢查法的可行性。方法 按《中國藥典》2000年版細菌內毒素檢查法和細菌內毒素法應用指導原則要求進行試驗。結果 將樣品稀釋成2倍后無干擾。結論 將樣品稀釋2倍，可用靈敏度0.5EU/ml的鱟試劑作細菌內毒素檢查。 關鍵詞 生附注射液 細菌內毒素檢查法 干擾試驗 生附注射液在臨床主要用于治療各型休克及心力衰竭、冠心病心絞痛、心肌梗死等心血管疾病，也可用于腦血管意外及再生障礙性貧血。其熱原檢查采用家兔法 ［1］ ，方法為取樣品溶液，劑量按家兔體重注射3kg/ml。本文參考《中國藥典》2000年版細菌內毒素檢查法 ［2］ 和細菌內毒素檢查法應用指導原則 ［3］ ，對生附注射液細菌內毒素檢查進行了方法學研究，結果報告如下。 1 材料鱟試劑（TAL）:批號:000812、010221;細菌內毒素Ⅰ作標 準:（CSE）批號:0008012;細菌內毒素檢查用水（BET水）:批號:010816;以上均為湛江安度斯生物有限公司出品;生附注射液:本院制劑，批號:000818、001006、001201。XW-80A型漩渦混合器;BHW-Ⅳ型電熱恒溫水浴鍋等;玻璃試管、吸管等均經(jīng)250℃干烤1h以上。 2 方法與結果 2.1 鱟試劑靈敏度復核 按《中國藥典》2000年版二部細菌內毒素檢查法 ［2］ 操作，結果見表1。 表1 鱟試劑靈敏度復核結果 根據(jù)公式:靈敏度測定值λc=1g -1 （∑x/4），計算出λc:0.420;0.420;0.5∈（0.5λ～2.0λ），符合靈敏度要求。 2.2 細菌內毒素限量值（L）的確定 ［3］ 根據(jù)公式L=K/M，式中L為細菌內毒素限值;K為細菌內毒素致熱閾劑量，大容量注射液一般定為10mg/（kg?h）;M為人用每公斤體重每小時最大給藥量。根據(jù)生附注射液每次最大用量為100ml，按普通中國人60kg體重計算M=1.7ml/（kg?h）;L=10/1.7=6EU/ml;MVD=L/λ=12。 2.3 干擾試驗的預試驗 干擾預試驗:在做干擾試驗前，要先做干擾預試驗。將三批經(jīng)熱原檢查合格的樣品原液，分別稀釋2、4、6、8、10倍后，制成細菌內毒素為2λ濃度的供試品液，用λ=0.5EU/ml的TAL進行試驗，同時作陽性對照、陰性對照。結果稀釋2倍的供試品液均呈陽性反應，認為此稀釋倍數(shù)是最高抑制濃度。 2.4 干擾試驗 將生附注射液2倍稀釋液與內毒素工作標準混合，進行干擾試驗，結果見表2。 表2 生附注射液干擾試驗結果樣品 2.5 樣品的細菌內毒素檢查 將三批檢查合格的供試品稀釋2倍，按《中國藥典》2000年版二部的細菌內毒素檢查法，依法檢查，結果供試品和陰性對照管均呈陰性，供試品 陽性管和陽性對照管均呈陽性，試驗結果成立。3個批號供試品的細菌內毒素檢查均符合規(guī)定，與家兔法結果一致。 3 討論 3.1 試驗結果的判定 當鱟試劑的Es在0.5～2.0λ，且Et均在0.5～2.0Es范圍內時，則認為供試品在該濃度下不干擾，從表1結果看:三個批號供試品都滿足以上條件，因此認為供試品2倍稀釋液無干擾。 3.2 鱟試劑最合適的pH范圍為6.4～8.0，pH過大或過小都會影響鱟試劑的靈敏度和細菌內毒素的活性，而導致試驗失敗 ［4］ ，本試驗所用的生附注射液的pH值為6.5，對實驗結果無影響。 3.3 鱟試劑靈敏度實測值因生產廠家不同而可能產生差異，從而導致兩種完全不同的檢驗結果，實驗時應注意鱟試 劑的選擇。 參考文獻 1 衛(wèi)生部藥典委員會編.藥品標準第6冊.生化藥品，第1分冊，1998，3. 2 中國藥典.第2部.2000，附錄:86. 3 中國藥典.第2部.2000，附錄:204. 4 褚衍立，張淑英，張淑梅.議鱟試驗法中不容忽視的幾個問題.中國醫(yī)院藥學雜志，2000，20（1）:62. （收稿日期:2003-01-14） 作者單位:530021廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥劑科 |
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