国产日产精品_国产精品毛片_91精品视频在线看_在线播放日韩_欧美电影《轻佻寡妇》

 ?
生物知識

細胞適應無血清培養基的方法

作者：admin 來源：本站 發布時間： 2011-01-07 16:51　 瀏覽次數：
購買進口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 www.mobfastly.com

1. 直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中。

　　一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞完全適應了無血清培養基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

2. 連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中，與直接適應相比較，連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。

（1） 以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75％有血清培養基：25％SFM 混合培養基中，傳代培養。

（2） 當細胞密度>5×105細胞/ml時，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清培養基：SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。

（3） 以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25％有血清培養基和75％ SFM中傳代培養。

（4） 當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養基中傳代培養。

（5） 每隔3到5天，當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

　　建議備份前一次混合培養的培養物，直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。

　　在適應過程中，最好不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質，因而更易于受外界因素的影響。

　　細胞培養適應替代血清：許多細胞利用連續適應方法能很好的適應，用包含FBS的的培養基和包含有替代血清的培養基1∶1（v∶v）的混合培養基培養細胞。通過下列的混合培養基的方式，連續幾代減少當前培養基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培養基。每次適應改變血清比例時，傳代細胞2到3 次。

　　培養可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復到以前的水平。



　　特別需要強調的是：配制無血清培養液必須使用高質量的水，如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質含量甚微，也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養能否成功的關鍵因素之一。

無血清培養基的優點

1. 可避免血清批次間的質量變動，提高細胞培養和實驗結果的重復性。

2. 避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。

3. 避免血清組分對實驗研究的影響。

4. 有利于體外培養細胞的分化。

5. 可提高產品的表達水平并使細胞產品易于純化。


缺點：

1. 細胞在無血清培養基中易受某些機械因素和化學因素的影響，培養基的保存和應用不如傳統的合成培養基方便。

2. 成本較高。

3. 針對性很強，一種無血清培養基僅適合某一類細胞的培養。

無血清培養基一些配方

1. 神經細胞，干細胞，PC12細胞

成份    終濃度

葡萄糖－－0.6％

谷氨酰胺－2mM

NaHCO3－－3mM

Hepes －－5mM

胰島素－－2.5μg/ml

轉鐵蛋白 －100ng/ml

孕 酮 －－20nM

丁二胺－－60μM

硒酸鈉－－30nM

青霉素－－50mg/ml

鏈霉素－－50mg/ml

最后用DF12添加到100ml即可

2. 各類小鼠胚胎癌細胞系培養基

DMEM/F12 1:1混合成1000ml

NaHCO3 2.4g

HEPES「1.5M」 10.0ul

硒酸（5*10-6M」 10.0ug

纖粘連蛋白 1ug/cm2「37度作用15－30分鐘）

胰島素 1000.0ug

轉鐵蛋白 5000.0ug

3. NIH3T3小鼠成纖維細胞培養基

DMEM/F12 1:1混合成1000ml

HEPES 15mM

大豆胰酶抑制劑 0.1％

胰島素 10.0ug/ml

轉鐵蛋白 25.0ug/ml

纖粘連蛋白 5.0ug/ml

4. 雜交瘤細胞培養基

DMEM/F12 1:1混合成1000ml

NaHCO3 1.2g/L

HEPES 15mM

胰島素 5.0ug/ml

氨基乙醇 20.0uM

硒酸 2.5mM

轉鐵蛋白 35.5ug/ml
 

購買進口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 www.mobfastly.com

所有試劑均用于科研 ???? 北京畢特博生物技術有限責任公司 版權所有
服務熱線：010-82015225/400-833-9299 | 傳真：010-62015131 | E-mail：info@bitebo.com
京ICP備05028556號-1 ??京公網安備11010802008747??

国产日产精品_国产精品毛片_91精品视频在线看_在线播放日韩_欧美电影《轻佻寡妇》
亚洲在线视频| 欧美精品尤物在线| 亚洲国产成人精品久久久国产成人一区 | 国产精品草草| 久久婷婷国产综合尤物精品| 亚洲图片你懂的| 亚洲国产婷婷香蕉久久久久久| 国产精品国产三级欧美二区 | 国产一区二区三区成人欧美日韩在线观看 | 欧美成人激情在线| 亚洲在线不卡| a4yy欧美一区二区三区| 在线观看91久久久久久| 国产视频在线观看一区| 欧美日韩中文字幕精品| 欧美高清免费| 欧美成人资源| 免费在线欧美黄色| 浪潮色综合久久天堂| 亚洲综合成人在线| 一区二区三区日韩精品视频| 亚洲精品久久久一区二区三区| 精品成人在线| 136国产福利精品导航| 在线观看一区欧美| 尤物99国产成人精品视频| 国内外成人免费视频| 国产亚洲精品久久飘花| 国产亚洲精品美女| 国产综合久久久久久鬼色| 在线播放豆国产99亚洲| 在线观看国产一区二区| 亚洲激情在线观看视频免费| 亚洲精品专区| 亚洲午夜影视影院在线观看| 亚洲一区免费网站| 欧美一区二区黄色| 久久深夜福利| 欧美黄色一区| 国产精品激情偷乱一区二区∴| 国产伦精品一区二区三区高清| 国产午夜久久| 亚洲成人在线视频播放| 亚洲免费成人| 欧美一区视频| 嫩草伊人久久精品少妇av杨幂| 欧美国产精品人人做人人爱| 欧美日韩美女在线观看| 国产精品视频在线观看| 在线成人h网| 一本色道久久综合亚洲精品按摩 | 一本久久综合亚洲鲁鲁| 午夜精品免费在线| 蜜桃精品一区二区三区 | 亚洲国产婷婷香蕉久久久久久99| 亚洲三级电影全部在线观看高清| 亚洲午夜免费福利视频| 久久婷婷av| 国产精品久久久久久久久久久久久久| 国产美女高潮久久白浆| 亚洲破处大片| 久久久www成人免费无遮挡大片 | 最新中文字幕亚洲| 午夜亚洲影视| 欧美激情亚洲综合一区| 国产亚洲精品综合一区91| 亚洲最新在线| 老司机aⅴ在线精品导航| 国产精品久久久久久久app| 亚洲福利视频一区二区| 欧美一级片在线播放| 欧美精品一区在线发布| 精品999在线播放| 亚洲在线中文字幕| 欧美精品亚洲精品| 红桃视频一区| 久久精品欧美日韩| 国产精品久久| 99人久久精品视频最新地址| 免费观看30秒视频久久| 国产一区二区三区丝袜| 亚洲免费一级电影| 欧美日韩视频在线观看一区二区三区 | 尤物精品国产第一福利三区| 性欧美暴力猛交69hd| 欧美色大人视频| 亚洲精品乱码久久久久久| 欧美在线地址| 国产一区二区激情| 亚洲欧美日韩另类精品一区二区三区 | 国产亚洲精品美女| 国产精品99久久久久久久女警| 欧美搞黄网站| 国产一区二区三区最好精华液| 亚洲永久网站| 国产精品一区久久| 亚洲在线第一页| 国产欧美亚洲日本| 亚洲在线视频| 国产欧美韩国高清| 亚洲国产美女| 麻豆精品一区二区av白丝在线| 在线观看不卡| 欧美88av| 99视频+国产日韩欧美| 欧美日韩免费一区二区三区| 亚洲三级电影在线观看| 欧美大胆a视频| 日韩视频亚洲视频| 欧美日韩在线精品| 亚洲免费一在线| 国产麻豆日韩欧美久久| 久久久国产一区二区| 精品av久久久久电影| 另类尿喷潮videofree| 亚洲第一久久影院| 欧美风情在线观看| 亚洲午夜久久久久久尤物| 国产精品一级在线| 欧美在线视频二区| 激情久久久久久| 久久综合给合| 一区二区欧美视频| 国产欧美日韩视频一区二区三区 | 黑人一区二区三区四区五区| 亚洲午夜视频在线| 国产精品啊v在线| 亚洲欧美不卡| 国产精品盗摄久久久| 久久一区二区三区超碰国产精品| 国产精品视频观看| 久久尤物视频| 国产尤物精品| 欧美日韩视频一区二区三区| 午夜视频在线观看一区二区| 国产伦精品一区二区三区| 嫩草伊人久久精品少妇av杨幂| 在线亚洲观看| 精品动漫3d一区二区三区| 欧美深夜影院| 欧美成人dvd在线视频| 亚洲一区亚洲| 日韩亚洲欧美成人| 精品成人在线| 国产日本欧美一区二区三区| 欧美高清视频在线 | 欧美日韩精品在线观看| 狼狼综合久久久久综合网| 亚洲欧美国产77777| 夜夜躁日日躁狠狠久久88av| 国产精品久久久久久久浪潮网站| 你懂的网址国产 欧美| 久久精品国产免费看久久精品| 亚洲性线免费观看视频成熟| 日韩亚洲欧美精品| 亚洲韩国青草视频| 精品av久久707| 黄色成人小视频| 国产婷婷色一区二区三区| 国产精品青草久久久久福利99| 欧美日韩欧美一区二区| 欧美韩国日本综合| 欧美aa在线视频| 欧美成在线视频| 欧美a级一区| 欧美成人午夜视频| 欧美不卡视频| 欧美激情一区二区三区在线视频观看| 另类天堂av| 欧美不卡高清| 欧美日韩 国产精品| 欧美精品激情blacked18| 欧美黄网免费在线观看| 欧美日韩麻豆| 国产精品久久久久久久久久ktv| 国产精品不卡在线| 国产欧美日韩在线观看| 韩国自拍一区| 亚洲国产视频一区| 亚洲美女诱惑| 亚洲在线一区二区| 欧美一区二区视频观看视频| 久久久蜜桃精品| 男人的天堂亚洲| 欧美视频在线播放| 国产精品久久久久久久浪潮网站| 国产欧美午夜| 亚洲国产高清自拍| 99精品久久免费看蜜臀剧情介绍| 亚洲视频精选在线| 久久不射网站| 欧美激情第3页| 国产欧美日韩另类视频免费观看| 国产视频一区在线| 亚洲国产一区二区视频| 宅男噜噜噜66国产日韩在线观看| 欧美在线播放一区| 欧美成人精品不卡视频在线观看| 欧美日在线观看| 国外成人在线|