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LONZA 龍沙細胞培養基

1, 治療級無血清間質干細胞培養基

2, X-VIVO 限定化學成分無血清造血細胞培養基

3, ProCHO4 無蛋白CHO培養基

4, UltraDOMA無血清雜交瘤細胞培養基

5, UltraCHO無血清CHO細胞培養基

6, UltraCULTURE 無血清培養基

7, UltraDOMA-PF無蛋白雜交瘤細胞培養基

8, Insect-XPRESS無蛋白昆蟲細胞培養基

9, UltraMEM 低血清培養基

10, UltraMDCK 限定化學成分無血清腎細胞培養基

11, Pro293限定化學成分無血清培養基

12, ProFreeze-CDM, NAO, 限定化學成分凍存培養基(2×)

13, PowerCHO限定化學成分無血清CHO培養基

14, ProNS0限定化學成分無蛋白質培養基

15, HL-1限定化學成分無血清培養基

16, PC-1限定化學成分無血清培養基

17, Lymphochrome 培養基

18, ProPer1限定化學成分無血清培養基

19, ProDoma無血清雜交瘤細胞培養基

20, ProVero 1無血清培養基

21, Cytogenetics Media細胞遺傳學培養基

22, PERMEXCIS(TM) 病毒生產培養基（一種PER.C6培養基）

 

詳情煩請查閱附件！ 

LONZA 龍沙 特殊無血清細胞培養基

 

北京畢特博生物技術有限責任公司

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影響因素

1.腫瘤標志物具有特異性和非特異性的雙重特點。

2.各種腫瘤特性的不同，如腫瘤的分期、大小、定位、組織來源及轉移趨向等的不同。

3.各種抗體的不同，如多克隆抗體、單克隆抗體、抗體決定簇和抗體親和性等的不同。

 4.各種檢測系統的不同，如檢測原理、標記物、實驗條件、檢測技術、檢測儀器和檢測敏感度等的不同。

5.檢驗人員的專業水平和技術經驗、以及實驗室條件和實驗的可靠性等的差異。

（1）甲胎蛋白（AFP）

 分子量約為7萬的糖蛋白，由590個氨基酸組成，存在于胎兒肝臟和卵黃囊。 主要用于原發性肝癌的診斷和分類，以及非精原睪丸癌、畸胎瘤等的診斷，是唯一一種和癌癥有明確特點關系的TM。在妊娠婦女和某些肝炎、肝硬化病人中輕度增高。利用親和電泳和免泳固定技術可將AFP分為Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3型。其中Ｌ3型是肝細胞癌早期特異性標志物,在檢測小肝癌和區別肝癌與良性肝病有很大價值。某些病理類型的肝癌(如假腺管型)細胞可能不分泌AFP。

（2）癌胚抗原（CEA）

 分子量約180萬的多糖蛋白復合物，位于胚胎和胎兒期的腸粘膜中。 分泌CEA的腫瘤大多位于空腔臟器。首選為結、直腸癌的標志物，特別是大腸癌，其次為胃、肝、肺、胰、乳腺癌的標志物。腺癌常高于上皮癌。未患癌人群中吸煙者有輕度增高。胰液和膽汁內CEA 含量可用于診斷胰腺或膽道癌，尿液中CEA含量可作為判斷膀胱癌預后的參考。血清CEA結合甲狀腺鈣素測定，有助于甲狀腺髓樣病的診斷和復發的估計。

（3）血清β2微球蛋白（β2 -MG）

分子量為11500的低分子量蛋白，為淋巴細胞、巨噬細胞分泌。臨床用于診斷多發性骨髓瘤。在腎功能不良時也升高。

（4）血清鐵蛋白（SF）

分子量為43-45萬的大分子蛋白，作為儲存鐵，存在于肝、脾和骨髓中。臨床為診斷隱性貧血較靈敏的指標。癌細胞具有較強合成SF的能力，可協助對腫瘤的診斷和預后估計。

（5）前列腺酸性磷酸酶（PAP）和前列腺特異抗原（PSA）

PAP為分子量約十萬的糖蛋白，酸性磷酸酶同功酶之一,是細胞的溶解體和分泌物的正常成分。具有組織特異性，主要用于診斷前列腺癌。

PSA是前列腺上皮細胞分泌的一種激肽釋放酶樣的蛋白酶，分子量為33000的單鏈糖蛋白。前列腺癌時PSA檢出率為70%～90%，在良性前列腺組織增生和女性乳腺癌時也可升高。 F-PSA占T-PSA10%～20%，前列腺癌時結合型PSA顯著增加，故F-PSA/T-PSA比值下降。

（6）人絨毛膜促性腺激素（HCG）

由胎盤滋養層細胞所分泌的一類分子量為4.5萬的糖蛋白類激素，含有145個氨基酸，由兩個獨立的氨基酸肽鏈α及β亞單位組成。腫瘤細胞以分泌β亞單位為特征。是絨毛膜上皮癌和惡性葡萄胎的腫瘤標志物。在性腺器官如卵巢、睪丸等發生胚胎性癌時也可檢出，可作為這些疾病的療效監測和預后判斷。少數肺癌、子宮內膜癌、子宮頸癌和白血病等惡性腫瘤亦能發現β-HCG升高，但陽性率不高。

（7）神經特異性烯醇化酶（NSE）

是烯醇化酶的一種同工酶，分子量約為87000， 是神經元、神經內分泌細胞中參與糖酵解的酶。腫瘤組織中糖酵解作用加強，細胞增殖周期加快，細胞內的NSE釋放進入血液，導致在血清中含量增加。是小細胞肺癌首選的TM(敏感性70%～80%)。在神經母細胞瘤時升高。腦脊液中NSE可作為腦損傷、腦梗死的診斷指標。 

（8）細胞角蛋白相關ＴＭ

細胞角蛋白(CK)參與構成上皮細胞骨架。依其氨基酸序列不同分為CK1～CK20共20種。Cyfra21-1為角蛋白19的片斷，適用于非小細胞肺癌(總的敏感性52.9%)的診斷，尤其是鱗癌。

（9）鱗狀上皮癌相關抗原（SCCA）

為組織抗原，可由婦女生殖道上皮以及不同器官的磷狀上皮癌分泌。為宮頸鱗癌的首選TM，也用于肺、食管、口腔、頜、面鱗癌，敏感性比Cyfra21-1低。

（10）胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ（PGI、II）

PGⅠ見于胃底粘膜的主細胞、頸粘液細胞及主頸粘液移行細胞；PGⅡ見于胃底腺主細胞、幽門腺、十二指腸腺。胃幾乎是PG的唯一來源，PG變化能夠反映出胃粘膜功能變化。胃癌患者血清PGⅠ、GⅠ/Ⅱ比值明顯下降。

日本學者以血清PGⅠ<70ng/ml、PGⅠ/ PGⅡ比值<3為臨界值,對胃癌的敏感性和特異性分別為84.6%和73. 5%。在對一萬余人進行健康體檢篩查時發現,有20%左右的人PGI水平降低,進一步作胃鏡檢查,確認胃癌21例,其中早期胃癌19例。

（11）糖類抗原(CA)

CA19-9 屬糖脂，其中粘蛋白分子量為10⁶Ｄ，抗原為3.6×10⁴Ｄ，由各種癌細胞、胎兒胃腸道、上皮和一些粘液細胞產生。

在由內胚層細胞分化來的多種上皮類惡性腫瘤血清中均可見升高。主要用于診斷消化道腫瘤，以胰腺癌的特異性最高，其次為結、直腸癌。

（12）生長激素（HGH）

HGH是一種蛋白質類激素，由腦垂體分泌，通過血液傳輸到全身。惡性腫瘤所分泌的異位激素，如垂體腺瘤、腎、肺等器官腫瘤均會引起HGH含量的升高，因此HGH的檢測有利于腎癌、肺癌及垂體瘤的聯合診斷。

（13）其他

 組織多肽抗原（TPA）作為組織相關抗原，主要用于消化道腫瘤、肺癌和乳腺癌等的診斷。組織多肽特異性抗原（TPS）更能提供腫瘤復發、轉移和進展的信號。膀胱癌抗原（UBC）主要用于膀胱癌的診斷。

幾種新的腫瘤標志物

（1）NMP22（nuclear matrix protein 22）

核基質蛋白22。膀胱移行上皮癌患者尿液中NMP22明顯高于正常人，有80%的特異性和準確性。尿路損傷可暫時、輕微升高。為非侵入性操作，對上尿路腫瘤的篩選有優勢，特別適合復發患者的隨訪。 2000年FDA通過的ELISA試劑盒，標本為尿液，血尿對檢測無影響。

NMP22與細胞學診斷膀胱腫瘤的敏感性的比較（G為惡性程度）

（2）Survivin

為凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP），正常終末期細胞不表達，胚胎期及腫瘤細胞表達。各種腫瘤細胞都有一定的陽性率。特別是對膀胱移行上皮癌有100%的陽性率（RT-PCR），特異性>90%。現有ELISA試劑盒（尿液標本），優點同上。

uPM3

檢測PCA3。PCA3是一個特異在前列腺癌表達的蛋白質，而且表達量大。通過檢測尿液中PCA3是診斷前列腺癌的又一新指標。 uPM3試驗的特異性和敏感性都超過tPSA僅次于前列腺活檢。

理想的腫瘤標志物特點和臨床意義

1）敏感性高 (指在患某種腫瘤的病人中出現陽性檢測結果的頻率，也就是真陽性率) 能早期檢測出腫瘤患者，可用于腫瘤普查。

AFP普查在我國是篩選和診斷無癥狀小肝癌的最主要方法。提高了早期肝癌的檢出率和5年生存率。前列腺酸性磷酸酶PSA是第一個由美國推薦用于篩查50歲以上男性前列腺癌的腫瘤標志[3]。

2）特異性好 (指沒患某腫瘤的人中出現陰性檢測結果的頻率，也就是真陰性率)能準確鑒別腫瘤/非腫瘤患者。

在腫瘤高危人群的篩選中，如家族性甲狀腺髓樣癌的親屬中患該癌癥的機會比一般人群高，對這些高危人群檢測降鈣素水平有助于篩選出可能患早期甲狀腺髓樣癌的患者。

3）有器官特異性，可用于腫瘤的診斷和鑒別診斷 PSA不同于其他組織中酸性磷酸酶，可用于前列腺癌的診斷和判斷轉移癌是否來自前列腺；用CEA和NSE可區別胃腸道腫瘤是腺癌(CEA陽性，NSE陰性)還是類癌(CEA陰性、NSE陽性)；惡性淋巴瘤的診斷和分類：如CD20(L26)-B細胞; CD3-T細胞;CD56-NK細胞; CyclinD1-套細胞;TdT-淋巴母細胞； Ki67-Burkitt淋巴瘤等。

4）腫瘤標志物水平與腫瘤體積大小、臨床分期相關，用以判斷預后 PSA水平可輔助前列腺癌診斷分期；在卵巢上皮癌組織HER-2 過表達對患者具有預后價值。

5）可反映腫瘤的動態變化，監測治療效果、復發和轉移 在腫瘤治療前、中、后檢測腫瘤標志物的水平可幫助了解治療效果，監測腫瘤有無復發和轉移，如CEA對大腸癌、AFP對肝癌、HCG對絨毛膜癌的監測、CA125監測上皮性卵巢癌。

6）可為臨床選擇化療藥提供依據 化療失敗的主要原因是腫瘤產生了耐藥性。腫瘤產生耐藥性與多種因素有關，如多藥耐藥基因(MDR1)、谷胱甘肽-Ｓ-轉移酶(GST-π)、拓撲異構酶II(TOPOII)等。其中最重要的是MDR1表達增高及其編碼產物的ｐ-糖蛋白(P-gp)增多。許多腫瘤在化療前即有MDR1表達增高，在化療后比例更高。

克服腫瘤化療耐藥的策略：根據檢測MDR1、P-gp、TOPOII、GST-π結果選擇非耐藥類的化療藥；采用耐藥逆轉劑，療效較為滿意的代表藥物有異博定、環孢素、利血平、酚噻嗪等。

7）可為臨床提供靶向治療依據 90%的B細胞淋巴瘤表達CD20抗原。1997年美國FDA通過用于臨床的第1個單抗-Rituximab（美羅華）。它的抗瘤機制是通過抗體依賴性細胞毒作用和補體介導的細胞毒作用殺傷CD20陽性B淋巴細胞。 2001年，由法國、比利時、瑞士的86個中心完成的臨床試驗，比較美羅華與CHOP化療聯合使用與單一CHOP化療治療彌漫性大B細胞淋巴瘤，結果聯合組完全緩解（CR）率明顯提高（76% 對 63%，P=0.005）而且不顯著增加臨床毒性。美羅華與IL-12聯合的II期試驗43例成人B細胞淋巴瘤，結果顯示69%的患者達到CR或部分緩解（PR）。

FDA推薦在每例原發性乳腺癌和轉移病灶中檢測ER和PR，無論是絕經期前后，還是輔助治療或姑息性治療，激素受體狀況決定患者是否從內分泌治療中獲益。

FDA批準使用熒光原位雜交法檢測C-erbB-2/ HER-2基因。25%～30%的乳腺癌患者HER-2呈過度表達，1998年FDA通過第2個用于臨床的單抗-Trastuzumab (Herceptin 赫賽汀）。赫賽汀治療HER-2過表達的乳腺癌患者，HER-2過表達的水平越高療效越好[11]。469例化療與赫賽汀聯用和單用化療在HER-2陽性轉移性乳腺癌患者表明聯用能顯著提高療效，延長中位生存期。

bcr-abl融合基因及其蛋白產物是慢性髓細胞性白血病（CML）慢性期發病的單一原因，而STI571（Gleevec）可特異性地抑制bcr-abl酪氨酸激酶，徹底切斷異常酪氨酸激酶的信號傳導，從而達到抗腫瘤作用。目前STI571經FDA批準，用于治療干擾素治療失敗的CML慢性期、危象期以及加速期。用STI571治療了54例干擾素治療失敗的CML慢性期患者，完全血液學反應率為98%（53/54），54%的患者產生細胞遺傳學反應（29/54），其中13%的患者達到完全細胞遺傳學緩解（7/54）。

STI571在治療48例復發或難治性Ph（＋）的急性淋巴細胞性白血病完全血液學緩解率19%，完全骨髓緩解率10%。

臨床應用

由于各標志物有組織特異性，在同一腫瘤可以出現幾種腫瘤標志物，又可在不同腫瘤出現同一種腫瘤標志物，因此提出了多種標志物聯合監測的必要性。根據不同腫瘤和不同腫瘤標志物的特性，適時、適當選擇特定腫瘤標志物非常重要。目前不少腫瘤標志物的臨床價值尚不確定，并缺乏標準化的試劑、質控標準和測定方法。不經選擇就進行多種標志物聯合檢測達不到提高檢測效率，還會增加檢測成本。腫瘤標志物并非聯合越多越好，應以最少的聯合達到最佳的效果，選擇出常見腫瘤的最佳標志物組合。

（1）肺 癌

CEA對肺腺癌較為敏感并且其陽性率隨病程發展而增高。

SCC和Cyfra21-1對肺鱗癌敏感。

NSE是小細胞肺癌的良好標志物。

血清CA125水平高于70μg/L的肺癌患者均屬于晚期。組織多肽抗原(TPA)和Cyfra21-1水平增高提示晚期肺癌。

GST-π在鱗癌和腺癌中表達陽性率分別為94%和70%，但在小細胞肺癌中表達很低。GST-π和NSE可作為不同病理類型肺癌鑒別診斷的重要檢測指標。

在肺原發性腫瘤中,良性者ｐ16表達89%以上,隨著癌組織分化程度的降低ｐ16的表達也降低，特別是小細胞癌最低，故ｐ16可提示腫瘤細胞的增殖活性并可預報預后。

（2）鼻咽癌

SCC和Cyfra21-1對鼻咽鱗癌敏感。

CEA對鼻咽腺癌較為敏感。

DR70蛋白對鼻咽癌的敏感性為84.8%，可與EBV IgA /VCA聯合應用,提高鼻咽癌診斷水平。

（3）原發性肝癌

AFP是原發性肝癌的首選標志物，但仍有25%～35%的原發性肝癌患者血清AFP呈陰性或低濃度陽性。如AFP、AFP異質體與B超檢查結合，可在癥狀出現前6～12個月作出診斷，使小肝癌診斷率提高到97．5%。AFP、AFP異質體也是反映病情變化和治療效果的敏感指標，有助于檢出亞臨床期復發與轉移。肝癌CA19-9 陽性率為64.6%。此外，γ-谷氨酰轉移酶（γ-GT）、谷胱甘肽S-轉移酶（GSTs）和脫-γ-羥基凝血酶原（DCP）等有較好的診斷價值，其中以γ-GT和GSTs敏感性和特異性最佳，對于小肝癌及AFP陰性肝癌診斷有重要意義。

（4）食管癌

SCC和Cyfra21-1對食管鱗癌敏感。食管癌患者外周血中CD44%升高可提示腫瘤復發或屬于晚期病人。

（5）胃癌

CEA、CA72-4、CA19-9是較好的聯合檢測胃癌指標，可顯著提高胃癌診斷的陽性率，有助于觀察療效和發現復發。

日本利用ＰＧI、ＰＧII進行人群普查，使胃癌的早診率提高到了90%。ＰＧI/ＰＧII比值降低是胃癌和胃腺瘤的高危信號。

在胃癌組織中Ｈ-ras（ｐ21）過表達和淋巴結轉移狀態密切相關。

胃癌患者外周血中CD44百分比升高與腫瘤發生部位、腫瘤大體類型、腫瘤大小、腫瘤分化程度、淋巴結轉移情況、臨床分期、年齡均有相關性。

（6）結、直腸癌

CEA和CA24-2聯合檢測是最佳標志物組合，可顯著提高診斷結直腸癌的敏感性和準確性。也可用于結、直腸癌術后療效評價、病情分期和復發監測。血清CEA水平變化與結腸癌Duke分期密切相關。當發生肝轉移時，CEA升高更為明顯。

美國推薦在結直腸癌術前CEA檢測有助于分期和制定治療計劃。但不應以CEA指標確定是否進行輔助化療。推薦術后2年或2年以上每2～3個月檢查1次血清CEA，若CEA升高，有必要進一步檢查轉移灶，但不推薦單用CEA作為常規療效監測指標。p53和ras也不作為篩選、診斷、分期和療效監控指標。

腸癌患者外周血中CD44百分比升高與腫瘤發生部位、腫瘤大體類型、腫瘤大小、腫瘤分化程度、淋巴結轉移、臨床分期、性別、年齡均有相關性。

（7）胰腺癌

CA19-9對胰腺癌的敏感性達80%，血清中含量的高低提示手術的難易程度，CA19-9低者預后較好；腫瘤復發時，CA19-9可再度升高。如果聯合CA 24-2、CEA則可把診斷率提到90%以上。CA125、CA50在胰腺癌也有一定的敏感性。

（8）乳腺癌

FDA推薦監測ER、PR和HER-2基因，為臨床提供治療依據。

CA15-3對早期（I、II期）乳腺癌陽性率較低。有研究顯示CA15-3升高較臨床癥狀及其他試驗提前5.3個月提示乳腺癌復發。

CEA對乳腺癌早期階段敏感性較高。CA15-3、CEA、Cyfra21-1聯合檢測有助于提高乳腺癌診斷和病情監測的敏感性和特異性。但FDA不推薦作為乳腺癌篩選、診斷、分期和常規療效監測檢查，在缺乏可測量病灶時，CEA升高提示治療失敗。在乳腺癌中檢測p53和組織蛋白酶D無臨床意義。

有報道檢測乳腺癌組織中的Ｐ-ｇｐ表達與否，對病人的預后判斷、治療方案的選擇以及聯合應用ＭＤＲ逆轉劑有積極的意義。

（9）卵巢癌

CA125是卵巢癌上皮癌的首選標志物[6]，但主要在卵巢漿液性癌及未分化癌中的陽性率比較高,而在粘液性癌中則陽性率比較低。ＣＡ125的升高較臨床上能檢查到腫瘤要早3～6個月。CA125和CA19-9聯合檢測提高了卵巢癌診斷的敏感性（91.6%）。CA 125對卵巢癌的療效和復發監測也有重要價值。應于術后第6天開始測定CA 125，然后依照其半衰期隨查，CA 125半衰期若≤25天,經過減瘤術后化療達到病理完全緩解(CR)的機率較半衰期＞25天的高3.585倍,半衰期長者顯示預后差，應給予加強治療。如果CA 125不能恢復到正常范圍，應考慮到有殘留腫瘤的可能性。卵巢癌治療后的1年中，應每3個月檢測1次CA 125，1年后每6個月測定1次。

CA125與CA72-4聯合檢測，兩者均陽性時特異性為100%，兩者均陰性時，說明無殘余腫瘤。

AFP是生殖腺內、外胚胎性腫瘤的首選標志物。AFP升高提示腫瘤組織中存在有內胚瘤成分，卵巢內胚竇瘤中特異性AFP升高，可用于診斷、療效觀察和預后判斷。

β-HCG檢測有利于絨毛膜癌進行臨床分期、療效觀察和預后判斷。

（10）宮頸癌、宮內膜癌

SCC和Cyfra21-1對宮頸鱗癌敏感。

CEA對宮頸腺癌、宮內膜腺癌較為敏感。

ER和PR可作為宮內膜癌常規檢測內容并指導內分泌治療。

檢測HPV可輔助診斷宮頸癌。

（11）前列腺癌

PSA是診斷前列腺癌最敏感的指標，血清PSA水平與前列腺癌腫瘤體積成一定比例關系，PSA水平越高，病情越重，預后較差。

f-PSA和總PSA（t-PSA）的聯合應用，采用f/t比值可以明顯提高診斷的敏感性，可作為良、惡性的鑒別指標。

（12）睪丸癌

血清AFP和β-HCG可進行臨床分期、療效觀察和預后判斷。

（13）膀胱癌

NMP22已由ＦＤＡ批準用于膀胱癌患者監測。但良性泌尿生殖系統疾病的假陽性率很高。

檢測尿中ＵＢＣ也是ＦＤＡ批準用于監測膀胱移行細胞癌。

Cyfra21-1用4ng/ml標準，其對膀胱癌檢出的敏感性可達96%，特異性可達74%。不僅對診斷，還可作為隨訪，預測復發。

FCM檢測尿液，膀胱沖洗液DNA可預測患者治療后腫瘤復發可能性。

（14）白血病和淋巴瘤

T細胞來源：CD2、CD3 (CD4、CD8 ) 、CD5、CD7

B細胞來源：CD19、CD20、CD22

造血干細胞：CD34

各期髓細胞：CD13、CD14、CD33、MPO（髓過氧化物酶）

紅白血病：GlyA（血型糖蛋白A）

巨核細胞白血病：CD41、CD42、CD61

霍奇金病：CD15、CD30

Ph1、bcr-abl融合基因檢測有利于靶向治療。

FCM動態觀察白血病化療前后DNA可發現微小殘留病變。

多種TM的聯合檢測及臨床應用

一般腫瘤治療后4-8周，如果TM的濃度明顯降低至正常水平，則表明腫瘤已基本消除；如果濃度降低很少，甚至不降低，則表明腫瘤還在增生或治療后復發，也可能發生轉移。目前單一標志物的檢測靈敏度及特異性尚難滿足臨床對早期診斷、療效及預后評估的要求，故多采用聯合檢測的方法。

遺傳標志物檢測的臨床應用

遺傳標志物（基因腫瘤標志物）：在正常細胞轉化成惡性細胞的整個演變過程，均涉及到癌基因及相關基因的活化、抑癌基因的失活以及某些染色體片段的丟失。