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| 購(gòu)買(mǎi)進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 www.mobfastly.com |
作者：張國(guó)慶 王斌 劉振疆 黃艷春 龐作良 摘要：目的：探討3種血清腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白（AFP）、AFP異質(zhì)體（AFPL3）和αL巖藻糖苷酶（AFU）聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌（PHC）的互補(bǔ)診斷價(jià)值及對(duì)肝癌早期診斷的意義。方法：對(duì)我院2003年7月~2004年3月收治的49例PHC、50例慢性乙型肝炎和20例正常對(duì)照聯(lián)合檢測(cè)AFP、AFPL3和AFU水平，采用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定AFP和AFPL3水平，采用速率法測(cè)定AFU水平。結(jié)果：PHC組與慢性乙型肝炎組、正常對(duì)照組血清AFP水平相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；PHC組與慢性乙型肝炎組和正常對(duì)照組的AFP均數(shù)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3項(xiàng)標(biāo)志物單項(xiàng)檢測(cè)的敏感性分別為65.3%、85.7%、49.0%；聯(lián)合檢測(cè)AFP和AFPL3或AFU可使檢出率提高至92.1%和83.2%；3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)PHC的檢出率高達(dá)97.0%。結(jié)論：聯(lián)合檢測(cè)AFP、APFL3和AFU 3項(xiàng)指標(biāo)可提高HPC尤其是AFP陰性HPC的診斷效率，對(duì)HPC的早期診斷有一定的指導(dǎo)意義。 關(guān)鍵詞: 原發(fā)性肝癌；甲胎蛋白；甲胎蛋白異質(zhì)體；αL巖藻糖苷酶；診斷 A study on the combined detection of AFP, AFPL3 and AFU in the diagnosis of primary hepatic cancer ZHANG Guoqing， WANG Bin， LIU Zhenjiang， et al (Department of Surgery, Affiliated Tumor Hospital ,Xinjiang Medical University, Abstract： Objective: To study the complementary value of alpha fetoprotein (AFP), alphafetoprotein variant and αLfucosidase to the diagnosis of primary hepatic cancer. Methods: Serum AFP, alpha fetoprotein variant and αLfucosidase were measured in 49 cases with primary hepatic cancer and 50 cases with chronic hepatitis B and 20 normal cases. The three indices were compared and analyzed for the their complementary diagnostic values to primary hepatic cancer. Results: The diagnostic sensitivities of AFP, alphafetoprotein variant and αLfucosidase to primary hepatic cancer were 65.3%、85.7%、49.0% respectively. Simultaneous determination of AFP and alphafetoprotein variant or αLfucosidase could increase the sensitivities to 92.1% and 83.2% respectively. Furthermore, combines detection of these three indices could make the diagnostic sensitivity as high as 97.0%. Conclusion: The combined assay of serum tumor markers is valuable in the diagnosis of primary hepatic cancer, especially in AFP negative patients. Key words: primary hepatic cancer；alphafetoprotein；alphafetoprotein variant；αLfucosidase；diagnosis 原發(fā)性肝癌（PHC）是一種惡性程度高、進(jìn)展快、預(yù)后差、侵襲性強(qiáng)的惡性腫瘤。甲胎蛋白（AFP）是診斷PHC的重要指標(biāo)，但30%～40%的PHC患者AFP陰性，因此尋找更特異、敏感的腫瘤標(biāo)志物和診斷方法是研究肝癌的重要課題［1］。大多數(shù)單個(gè)標(biāo)志物檢測(cè)敏感性和特異性都偏低，近年來(lái)提倡多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)以提高檢測(cè)的靈敏度和特異度。本文對(duì)我院2003年7月~2004年3月收治的49例PHC、50例慢性乙型肝炎患者和20例正常對(duì)照聯(lián)合檢測(cè)AFP、AFP異質(zhì)體（AFPL3）和αL巖藻糖苷酶（AFU）水平，以觀察各標(biāo)志物對(duì)PHC的互補(bǔ)診斷價(jià)值及早期診斷的意義，尤其是AFP陰性的PHC患者的檢出率，為進(jìn)一步治療PHC提供依據(jù)。 1資料與方法 1.1臨床資料我院2003年7月~2004年3月收治的49例疑為PHC的患者，后經(jīng)病理診斷證實(shí)為PHC患者(PHC組)；50例慢性乙型肝炎患者為第一附屬醫(yī)院傳染科患者（慢性乙型肝炎組）；20例本院健康體檢者作為正常對(duì)照組。3組的年齡、性別等一般資料經(jīng)檢驗(yàn)具有均衡性。 1.2方法患者入院后1周內(nèi)清晨空腹抽取靜脈血2 ml，迅速分離血清，-20℃貯存?zhèn)錅y(cè)，測(cè)定前取出標(biāo)本，待自然復(fù)融后檢測(cè)血清中AFPAFPL3和AFU水平。采用2010型電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（羅氏寶靈曼公司）及配套AFP化學(xué)發(fā)光免疫試劑測(cè)定AFP；采用AFU速率法檢測(cè)試劑盒在CX9全自動(dòng)生化分析儀（德國(guó)貝克曼公司）上測(cè)定AFU；采用親和吸附法測(cè)定并計(jì)算AFPL3［2~4］。結(jié)果判斷：血清AFP>25 μg/L為陽(yáng)性，血清AFU>40 U/L為陽(yáng)性，血清AFPL3>25%為陽(yáng)性。 1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各組均數(shù)之間的差異比較采用秩和檢驗(yàn)，各組之間陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。 2結(jié)果 49例PHC患者AFP、AFPL3、AFU檢測(cè)結(jié)果顯示，AFP、AFU均為陰性，而AFPL3為陽(yáng)性且經(jīng)病理證實(shí)為PHC者9例，約占AFPL3陽(yáng)性總數(shù)的21％。其中1例CT檢查及病理切片顯示，病灶直徑小于3 cm，為早期病變。 2.13組AFP、AFPL3、AFU檢測(cè)結(jié)果的比較PHC組血清AFP、 AFPL3水平高于正常對(duì)照組（P<0.001），PHC組AFP水平明顯高于慢性乙型肝炎組（P0.001）(表1)。 表13組血清AFP、APPL3、AFU水平檢測(cè)結(jié)果（略） 2.23組AFP、 AFPL3、AFU陽(yáng)性檢出率PHC組AFPL3的陽(yáng)性率為85.7%,AFP陽(yáng)性率為65.3%，AFU陽(yáng)性率最低，為49.0%(表2)。 表23組AFP、AFPL3、AFU陽(yáng)性檢出率（略） 2.33組AFP與AFPL3聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果 PHC組患者血清AFPL3檢出率較AFP略高，但特異性不高(表3)。 表33組AFP與AFPL3檢測(cè)結(jié)果[略] 2.4AFP、AFPL3、AFU聯(lián)合檢測(cè)PHC陽(yáng)性檢出率3種方法聯(lián)合檢測(cè)PHC，陽(yáng)性檢出率達(dá)97.0%，且可避免單項(xiàng)檢測(cè)出現(xiàn)的漏檢情況(表4)。 表4AFP、AFPL3、AFU聯(lián)合檢測(cè)PHC陽(yáng)性檢出率檢測(cè)[略] 3討論 3.1AFPAFP是一種糖蛋白，每分子含兩條復(fù)合糖鏈，不同組織合成的AFP糖鏈組成不同。基于其蛋白質(zhì)部分的癌胚性，臨床采用放射免疫、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)測(cè)定AFP的蛋白部分，將其作為肝臟惡性腫瘤診斷的指標(biāo)，是一種目前公認(rèn)的診斷肝癌的最佳標(biāo)志物［5］，作為PHC的輔助診斷指標(biāo)應(yīng)用較廣，但有30%～40%的肝癌患者血清AFP呈陰性而被漏診。本組PHC患者AFP陽(yáng)性率為65.3%，與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的60%～70%相近［6,7］。 3.2AFPL31970年，Purves等［8］首先應(yīng)用淀粉凝膠電泳分離出人的AFP異質(zhì)體。扁豆凝集素（LCA）反應(yīng)性AFP與LCA結(jié)合位點(diǎn)是門(mén)冬酰胺連接的巖藻糖化AFP，在植物凝集素親和性電泳中位于第三區(qū)帶，稱AFPL3［9］。AFP分子存在異質(zhì)性，尤其是糖鏈的差異較大，導(dǎo)致一些PHC患者AFP檢測(cè)陰性或持續(xù)低濃度陽(yáng)性。PHC患者血清AFPL3含量平均為（49.13±27.20）%（0～100%），非癌肝病患者血清APFL3含量為（93.30±7.66）%，假陽(yáng)性率為1.6%，PHC患者AFP常升高，但許多良性肝病也可有AFP升高，單憑AFP結(jié)果有時(shí)很難區(qū)分良惡性病變［1,5,6］。檢測(cè)APFL3水平尤其對(duì)于AFP 30～400 μg/L者具有較好的診斷價(jià)值，屠振興等［10］報(bào)道35例肝癌病人中只有7例AFP>400 μg/L，而17例AFP<400 μg/L及B超、CT檢查陰性的PHC患者檢測(cè)APFL3后可立即確診，至少縮短2個(gè)月的隨訪期。 3.3AFUAFU屬溶酶體酸性水解酶類， AFU超過(guò)40U/L應(yīng)考慮PHC。本組PHC患者AFU陽(yáng)性率為49.0%，較楊桐樹(shù)等［11］報(bào)道的60%低，分析原因有：（1）是本組病例數(shù)較少;（2）所用試劑為進(jìn)口試劑國(guó)內(nèi)分裝而致純度不足。但在AFP陰性的17例中有8例AFU陽(yáng)性，兩者互為補(bǔ)充，可提高PHC的檢出率。 3.4AFP、AFPL3、AFU聯(lián)合檢測(cè)49例PHC患者AFP、AFPL3聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率為92.1%，AFPL3、AFU聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率為89.6%，AFP、AFU聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率為83.2%，三者聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率為97.0%。PHC患者血清AFPL3檢出率較AFP略高，但特異性不高，3項(xiàng)標(biāo)志物同時(shí)檢測(cè)，可明顯提高檢測(cè)的特異性和敏感性，其PHC的陽(yáng)性檢出率可達(dá)97.0%。 本研究結(jié)果顯示，AFP、APFL3和AFU聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PHC診斷有意義，平行試驗(yàn)可提高檢測(cè)敏感度，系列試驗(yàn)可提高檢測(cè)特異度，本組病例AFU值較楊酮樹(shù)等［11］報(bào)道的低，但能檢出AFP、AFPL3陰性的肝癌患者，具有互補(bǔ)性。AFP、AFPL3和AFU聯(lián)合檢測(cè)能提高PHC診斷的靈敏度和陽(yáng)性檢出率，對(duì)PHC的早期診斷，尤其是AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。 近年發(fā)現(xiàn)血清AFP陰性的PHC有增多趨勢(shì)［12］，因此開(kāi)發(fā)更新、更特異、更敏感的標(biāo)志物已成為緊迫的課題，尋找癌胚特異性的同工酶或異質(zhì)體，尋找特異性亞組成分成為當(dāng)前肝癌血清標(biāo)志物研究的方向。 參考文獻(xiàn)： ［1］湯釗猷.現(xiàn)代腫瘤學(xué)［M］.第2版.上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，2001. 553. ［2］汪子偉，卓廣超，冷建杭，等.甲胎蛋白異質(zhì)體的親和吸附法測(cè)定［J］.中國(guó)腫瘤，2003，12（2）：120121. ［3］張惟杰.復(fù)合多糖生化研究技術(shù)［M］.第1版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社1987.356. ［4］張龍翔，張庭芳，李令媛.生化實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)［M］.第2版.北京：高等教育出版社,1997. 177. ［5］沈錚，沈霞.甲胎蛋白及其異質(zhì)體檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2000，15（6）：361362. ［6］王愛(ài)華，王華梁，方芳，等.AFP和AFP異質(zhì)體對(duì)405例原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值探討［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2002，17（2）：8789. ［7］Oka H，Saito A，Ito K，et al. 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