國(guó)外的同學(xué)說(shuō)一般他們克隆都是直接購(gòu)買(mǎi)感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，實(shí)驗(yàn)效率很高的。我總是以為如果是一般的克隆實(shí)驗(yàn)，自己做感受態(tài)好像夠用了－－如果是建庫(kù)，購(gòu)買(mǎi)現(xiàn)成的感受態(tài)細(xì)胞就是非常必要的首選，因?yàn)檗D(zhuǎn)化效率確實(shí)比實(shí)際手工制備的高2－3個(gè)數(shù)量級(jí)以上，特別是建庫(kù)，能實(shí)實(shí)在在地提高實(shí)驗(yàn)的效率。實(shí)際上，除了建庫(kù)以外，Stratagene為更好的表達(dá)蛋白、以及轉(zhuǎn)化效率較低的巨無(wú)霸質(zhì)粒，而特別優(yōu)化了一些感受態(tài)細(xì)胞，做表達(dá)的人其實(shí)可以參考一下，有點(diǎn)用處的。生物通在這里借用Merck公司提供的資料供大家參考。
Stratagene的XL10-Gold®幾乎算得上是高效轉(zhuǎn)化的代名詞了，研究者一旦要克隆大質(zhì)粒、連接DNA和建庫(kù)，克隆甲基化DNA，進(jìn)行藍(lán)白斑篩選等，首選的就是XL10-Gold®和其衍生菌。XL10-Gold®用途包括：
--克隆大DNA：包括表達(dá)質(zhì)粒，基因組DNA克隆
--構(gòu)建質(zhì)粒文庫(kù)：減少DNA大小偏倚性，使全長(zhǎng)cDNA克隆、雙雜交質(zhì)粒等各種大小的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率更接近，提高文庫(kù)代表性（比DH10B高25倍）。
Hte 基因型
Hte（高效轉(zhuǎn)化）基因型是Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性提高大質(zhì)粒、連接DNA的宿主菌基因型，并使細(xì)胞生長(zhǎng)加快（當(dāng)天獲得菌落），已經(jīng)成功應(yīng)用于25kb超螺旋DNA和8kb連接DNA的克隆。XL10-Gold®，BL21-Gold，BL21-CodonPlus®，SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列細(xì)胞都帶有這個(gè)新的性狀。
超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞
Stratagene提供多種>5 x109 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA轉(zhuǎn)化效率的化學(xué)法超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞正是克隆獲得大質(zhì)粒、連接DNA克隆和建庫(kù)時(shí)最值得推薦的。
電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
Stratagene的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞特別耐受電擊處理，方便好用，在DNA材料極珍貴、量少時(shí)，或構(gòu)建有代表性文庫(kù)時(shí)，建議采用電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞。ElectroTen-Blue®細(xì)胞是目前商品化的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞中效率最高的，達(dá)到>3 x1010 轉(zhuǎn)化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue，XL1-Blue MRF’，SURE®，ABLE® 和TG1等細(xì) 胞也提供電轉(zhuǎn)化形式感受態(tài)細(xì)胞。
SURE®－克隆不穩(wěn)定DNA
大腸桿菌DNA修復(fù)系統(tǒng)會(huì)針對(duì)重復(fù)序列、二級(jí)結(jié)構(gòu)（如Z-DNA）等真核DNA進(jìn)行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細(xì)胞針對(duì)uvrC,umuC,SbcC和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進(jìn)行突變，提高了真核來(lái)源、不規(guī)則DNA的穩(wěn)定性達(dá)20倍以上，并且適合克隆甲基化DNA。提供化學(xué)和電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，效率分別達(dá)1x1010 和1x109 。
ABLE®－克隆毒性DNA
目的DNA的蛋白產(chǎn)物常常對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，通常的解決辦法是采用低拷貝質(zhì)粒，或者采用極為嚴(yán)緊的表達(dá)調(diào)控。為了獲得穩(wěn)定的克隆，ABLE細(xì)胞減少ColE來(lái)源質(zhì)粒的拷貝數(shù)（如pUC、pBluescript系列載體），以達(dá)到保持相對(duì)較高拷貝數(shù)的同時(shí)使本底表達(dá)對(duì)于細(xì)胞的毒性降至最低的效果。
MR系列®－克隆甲基化DNA
真核基因組DNA常常因高度甲基化而被大腸桿菌修飾系統(tǒng)切割、刪除，在構(gòu)建文庫(kù)時(shí)，由于要對(duì)cDNA進(jìn)行甲基化保護(hù)，某些cDNA克隆也較難完成。采用Stratagene的MR (Minus Restriction)突變刪除了修飾系統(tǒng)的感受態(tài)細(xì)胞，可以構(gòu)建質(zhì)量非常高的cDNA和基因組文庫(kù)。這些細(xì)胞包括：用于大質(zhì)?？寺〉腦L10-Gold®超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞，克隆連接DNA、轉(zhuǎn)化效率 目前最高的ElectroTen-Blue®電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，單次反應(yīng)包裝的SoloPack® Gold，以及XL2-Blue MRF´ ，XL1-Blue MRF´ Kan（四環(huán)素抗性質(zhì)粒），XL1-Blue MR（沒(méi)有F´附加體），克隆有二級(jí)結(jié)構(gòu)的SURE細(xì)胞等。
重點(diǎn)推薦
Stratagene的ElectroTen-Blue（轉(zhuǎn)化效率>3×1010 ）和Novagen的Nova XG Zappers（轉(zhuǎn)化效率>1×1010 ）電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞均具有endA－基因型，保證質(zhì)粒優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)；recA－重組缺陷基因型適合甲基化DNA克隆，確保片段不被刪除或重排；能以IPTG誘導(dǎo)進(jìn)行藍(lán)白斑篩選（lacZΔM15），也使這兩種細(xì)胞非常好用。此外，ElectroTen-Blue還可被M13單鏈?zhǔn)删w感染（F’）。
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