Apoptame
用途：用于細(xì)胞培養(yǎng)和低溫儲(chǔ)存的泛-caspase細(xì)胞凋亡抑制劑
描述：
在進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞將會(huì)受到多種能夠促進(jìn)凋亡的物理和生理上的壓力刺激。在細(xì)胞傳代、細(xì)胞保存和從低溫貯藏狀態(tài)復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)都會(huì)有重大的凋亡應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生。在這些過程中，不同種類的細(xì)胞在細(xì)胞生存力上都會(huì)發(fā)生不同程度的損失。阻止或抵消這些細(xì)胞凋亡信號(hào)便會(huì)給細(xì)胞培養(yǎng)過程的進(jìn)展、穩(wěn)定性和功能可靠性帶來重大改善。
眾所周知，血清具有提供營(yíng)養(yǎng)、抗凋亡及促細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，這些對(duì)細(xì)胞生存力的保持具有十分重要的意義。盡管如此，甚至在添加有血清的培養(yǎng)物中，劇烈應(yīng)激反應(yīng)之后依然會(huì)有凋亡現(xiàn)象發(fā)生。這種應(yīng)激反應(yīng)能夠創(chuàng)造一種環(huán)境，其中凋亡活性超過內(nèi)生保護(hù)因子抗拒凋亡的能力。添加caspase 抑制劑可以提供更高的保護(hù)水平，從而明顯提高含血清和血清耗盡兩種細(xì)胞培養(yǎng)體系的效率、繁殖能力和穩(wěn)健性。Caspase 抑制劑在瞬間轉(zhuǎn)染和器官切片培養(yǎng)等敏感環(huán)境中顯得尤為重要。
Apoptame™ F 和Q 為高濃度的細(xì)胞培養(yǎng)添加物， 在DMSO 中含被證實(shí)的凋亡抑制劑。提供的溶液濃度為20mM，按1 ul/ml（1:1000比例稀釋）的量加入培養(yǎng)基內(nèi)防止凋亡。在常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)、添加新培養(yǎng)基或細(xì)胞凍存之前加入添加劑Apoptame™ F和Q。
APOPTAME™ F - 第一代細(xì)胞凋亡抑制劑
肽－氟甲基甲酮（FMK）類caspase 抑制劑可以有效地應(yīng)用于體內(nèi)和體外，它們具有高效力、強(qiáng)細(xì)胞滲透性，屬于不可逆抑制劑，目前已經(jīng)廣泛用于凋亡研究工作中并已被確定為此領(lǐng)域的基準(zhǔn)試劑。體內(nèi)模型研究發(fā)現(xiàn)，無論在誘導(dǎo)凋亡發(fā)生之前或之后，用此抑制劑進(jìn)行處理可以減少組織損傷和成倍提高細(xì)胞存活率。
體外細(xì)胞研究主要集中在探求凋亡機(jī)理和caspase 相互作用。然而現(xiàn)在越來越多的研究轉(zhuǎn)向強(qiáng)調(diào)caspase 抑制劑在增進(jìn)T-細(xì)胞、神經(jīng)元、破骨細(xì)胞、造血細(xì)胞和胎兒胰腺細(xì)胞及其他細(xì)胞中組織培養(yǎng)的可靠性和效率方面的潛力。
Apoptame™ F 在DMSO 中含有一種氟甲基甲酮（FMK）抑制劑，可用作細(xì)胞培養(yǎng)添加劑或用于阻止凍存細(xì)胞復(fù)蘇過程中凋亡的發(fā)生。建議在細(xì)胞培養(yǎng)基中以1:1000的稀釋度加入此添加物。濾膜過濾除菌，-20℃ 貯存，使用前放到室溫（18.5℃融化）。
APOPTAME™ Q - 第二代細(xì)胞凋亡抑制劑
第二代保護(hù)細(xì)胞的新產(chǎn)品推出了一個(gè)新型的非FMK結(jié)構(gòu)、廣譜的 caspase 抑制劑，在提高細(xì)胞傳代效率、穩(wěn)定性、降低細(xì)胞毒性等方面作出了改進(jìn)。
活化的抑制劑溶于DMSO，是一個(gè)小分子量的疏水化合物。建議20mM 的母液 按1:1000的比例稀釋后直接加入組織培養(yǎng)基中（1:1000相當(dāng)于1 ul/ml培養(yǎng)基）。建議冰箱內(nèi)取出的細(xì)胞用細(xì)胞盤培養(yǎng)后直接添加Apoptame™產(chǎn)品。Apoptame™ Q在37°C培養(yǎng)條件下，一直保持抑制活性高達(dá)60h。
Apoptame™ Q 證實(shí)能夠抑制重組蛋白Caspases 1, 3, 8,9的活性，其IC50
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品貨號(hào)
描述
規(guī)格
價(jià)格
2070140
Apoptame™ F
0.5 ml
2070175
Apoptame™ F
0.1 ml
2070240
Apoptame™ Q
0.5 ml
2070275
Apoptame™ Q
0.1 ml
Apoptame™ 使用程序：
· 驗(yàn)證是否提高凍存細(xì)胞復(fù)蘇率的建議程序：
至少聚集1x107 6
（2） 用凍存培養(yǎng)基重懸細(xì)胞使其終濃度約為100,000個(gè)細(xì)胞/ml;
（3） 對(duì)照： 1µL DMSO/ml體積的對(duì)照組細(xì)胞；（建議多做幾個(gè)平行）
（4） 測(cè)試組 ：1µL Apoptame™/ml體積的待測(cè)組細(xì)胞，此時(shí)Apoptame™的濃度為20 µM ；
（5） 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟凍存細(xì)胞（直接加入液氮或冷凍程序）；
（6） 48h 后取出幾管對(duì)照組和測(cè)試組細(xì)胞凍存液。
（7） 在合適的三角瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)孵化控制組和待測(cè)組細(xì)胞，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在解凍后的不同時(shí)期記錄復(fù)蘇率、細(xì)胞活性及生長(zhǎng)率。
· 驗(yàn)證是否提高細(xì)胞活性的建議程序：
對(duì)照組 ：1µL DMSO/ml體積的對(duì)照組細(xì)胞；（建議多做幾個(gè)平行）
測(cè)試組 ：1µL Apoptame™/ 2 ml體積的待測(cè)組細(xì)胞，此時(shí)Apoptame™的濃度為10mM；（也可以稀釋Apoptame™以 1µL加入4mL培養(yǎng)液，濃度為5µM ）。在合適的三角瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)孵化控制組和待測(cè)組細(xì)胞，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要不同時(shí)期記錄細(xì)胞活性及生長(zhǎng)率。
注意事項(xiàng)：
若Apoptame™以凍干粉形式供應(yīng)，必須將其懸浮在100%的DMSO溶液中。加入1mg的該產(chǎn)品至100µL DMSO中，配成20mM的母液。可以配制更高的濃度。我們?cè)晒ε渲艫poptame™ Q母液其濃度高至400mM 或者1mg/5 µL，但是濃度太高較難處理。
廠家說明：
MP Biomedicals 生物醫(yī)學(xué)公司是位于美國(guó)加利福尼亞州的知名生命科學(xué)和生物技術(shù)廠商。2004年底成功收購Qbiogene、ICN，現(xiàn)在全球有5個(gè)大型倉庫，能夠及時(shí)供應(yīng)各行業(yè)需求，亞洲倉庫位于新加坡。它致力于生命科學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和探索。目前它提供55000多種產(chǎn)品，是世界上能全面提供生命科學(xué)產(chǎn)品和臨床診斷產(chǎn)品的幾家廠商之一。前塵生物為MPbio公司正規(guī)代理，提供MP bio公司所有產(chǎn)品的售后服務(wù)。
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