XL10-Gold Chemically Competent Cell 使用說明書
產品說明：
XL10-Gold是目前轉化效率最高的感受態細胞，由Stratagene開發的特異性用于大質?；蛘滟F連接產物轉化或構建文庫的超級感受態細胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發的特異性提高感受態轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型，已成功應用于40kd質粒的構建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統；同時缺失核酸內切酶(endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性；TetR， CamR賦予菌株四環素和氯霉素抗性；lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍、白斑篩選。XL10-Gold感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>2×109 cfu/μg。
產品組成：
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組 分
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XL10-Gold Chemically Competent Cell
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10 × 100 µL
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50× 100 µL
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pUC19（control vector，10pg/μL）
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10μL
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10μL
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* 基因型：TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]
儲存條件：
-80℃±10℃保存6個月。請勿將本品置于-20℃或液氮中保存。
使用方法：
1. 將感受態細胞從-80℃冰箱中取出，置于冰水浴中融化。
2. 將目的DNA（質?；蜻B接產物）加入到100μL感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30分鐘。
3. 42℃水浴熱激35秒（非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.），立刻置于冰上，靜置2～3分鐘，晃動會降低轉化效率。
4. 向離心管中加入200μL無抗LB、TB或SOC培養基，混勻后于220rpm，37℃搖床振蕩復蘇60分鐘，使轉化物表達抗性基因。
5. 根據實驗要求吸取適量菌液，涂布至相應抗生素的2YT或LB培養基上，室溫正置10分鐘，待菌液被平板充分吸收后，37℃倒置過夜培養。
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